Banner

检测畜禽益生菌黏附性的研究分析

首页 > 新闻动态 > 内容

检测畜禽益生菌黏附性的研究分析

Date: 2020-07-11

  畜禽益生菌的黏附能力是评价该菌株是否能够定植到肠道的一个决定因素,只有菌株定植到肠道内才能发挥益生功效。研究结果表明黏附到肠黏膜上的益生菌具有提高机体抵御能力、平衡肠道菌群、减少病原菌数量等能力。因此评价菌株的黏附能力是作为候选益生菌的一个重要指标。

  评价菌株黏附性的方法主要有直接测定法和间接评价法。其中,直接测定法是采用体外构建模型的方法评价菌株对上皮细胞或黏蛋白的黏附情况。体外细胞模型通常采用Caco-2、HT-29和HeLa细胞,将等体积的菌株培养液接种于含有盖玻片的细胞孔内并培养至细胞全融合的细胞孔内,孵育1-2h,甲醇固定,革兰氏染色,显微观察计数,计算黏附率。但该方法有一定的缺陷,可能不能全反映体内的黏附情况,通常情况下菌体与肠道上皮细胞之间存在一层黏液层,畜禽益生菌若与上皮细胞间发生作用引起特异应答,先需要黏附于黏液层。因此,可采用体外黏蛋白模型评价菌株对黏蛋白的黏附特性,该模型常采用 ELISA法进行。具体步骤为:

  1、肠黏液蛋白的制备:刮取健康畜禽肠黏膜蛋白混合物,PBS混匀后离心收集上清。用BCA( Bicinchoninic Acid,二喹啉甲酸)法测定黏蛋白浓度,并调整浓度后-80℃保存备用;

  2、菌体悬液的制备:将菌株培养液离心去上清,PBS洗涤后重悬,并调整菌液浓度后4℃保存备用;

  3、体外黏附:在96孔酶标板中加入调整好浓度的黏液蛋白100u,4℃孵育过夜,使蛋白固定在细胞培养板上;用PBS冲洗以除去未固定的黏液蛋白,每孔加入100ul菌体悬液,37℃孵1h后用PBS冲洗以除去未黏附的菌类;加入0.%的 Triton X-100裂解液200ul,释放黏附的菌类,37℃孵育30min;梯度稀释后,采用平板计数法测定活菌数,计算黏附率。

  间接评价法包括菌类表面的疏水性和自聚合力等,可间接反映畜禽益生菌黏附性的强弱,疏水性或自聚合力越大,黏附性越高。但不同菌株的表面疏水性和自聚合力与其黏附性的相关程度不同,有些呈正相关有些可能不相关。因此,采用间接评价法时,需结合直接测定法的结果进行综合评估。